1、與其他酵母一樣，在無性生長期主要以單倍體形式存在，當(dāng)環(huán)境營養(yǎng)限制時，常誘導(dǎo)2個生理類型不同的接合型單倍體細(xì)胞交配，融合成雙倍體畢赤酵母研究意義巴斯德畢赤酵母的一個生物學(xué)特點是，甲醇代謝所需的醇氧化酶被分選到過氧化物酶體中，形成區(qū)域化以葡萄糖作碳源時，菌體中只有1個或很少幾。

2、外源基因在甲醇以外的碳源中處于非表達(dá)狀態(tài)，而在培養(yǎng)液中加入甲醇后，外源基因即被誘導(dǎo)表達(dá)巴斯德畢赤酵母中存在著一種稱為微體的細(xì)胞器，其中大量合成過氧化物酶，因此也稱為過氧化物酶體合成的蛋白質(zhì)貯存于微體中，可免受蛋白酶的降解，且不對細(xì)胞產(chǎn)生毒害。

3、感受態(tài)誘導(dǎo)基因如AOX1基因是響應(yīng)甲醇的誘導(dǎo)子，當(dāng)添加甲醇時，會啟動該基因的表達(dá)通過適當(dāng)控制聚甲醇濃度和培養(yǎng)時間，可以實現(xiàn)目標(biāo)蛋白在感受態(tài)下的高水平表達(dá)畢赤酵母gs115感受態(tài)制備的原理主要是通過構(gòu)建表達(dá)載體轉(zhuǎn)化。

4、一旦在培養(yǎng)液中添加甲醇，就會觸發(fā)外源基因的誘導(dǎo)表達(dá)巴斯德畢赤酵母體內(nèi)的一種獨特細(xì)胞器微體，是其的一大特點微體內(nèi)富含過氧化物酶，因此也被稱為過氧化物酶體在微體中合成的蛋白質(zhì)得以儲存，免受蛋白酶的降解，同時不對細(xì)胞產(chǎn)生有害影響，這為其作為外源基因表達(dá)的平臺提供了有利條件。

5、Pichiapastoris酵母菌體內(nèi)無天然質(zhì)粒，所以表達(dá)載體需與宿主染色體發(fā)生同源重組，將外源基因表達(dá)框架整合于染色體中以實現(xiàn)外源基因的表達(dá)包括啟動子外源基因克隆位點終止序列篩選標(biāo)記等表達(dá)載體都是穿梭質(zhì)粒，先在大腸桿菌復(fù)制擴(kuò)增，然后被導(dǎo)入宿主酵母細(xì)胞為使產(chǎn)物分泌胞外，表達(dá)載體還需帶有信號肽。

6、SacI線性化后，通過LICl方法將構(gòu)建好的重組載體轉(zhuǎn)到畢赤酵母，MD板G418板篩選到菌落后，怎樣鑒定畢赤酵母是Mut+還是Muts，若是 Mut+如何誘導(dǎo)，請大家指教，不勝感激回復(fù)用點MMMD平板點方法準(zhǔn)備幾塊MMMD，平板用maker筆劃小格子，標(biāo)號，兩種平板點標(biāo)號要一一對應(yīng)準(zhǔn)備無菌牙簽，點取G418板上。

7、用甲醇誘導(dǎo)畢赤酵母表達(dá)目的蛋白前，為什么用甘油擴(kuò)菌 酵母表達(dá)系統(tǒng)作為一種后起的外源蛋白表達(dá)系統(tǒng)，由于兼具原核以及真核表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點，正在基因工程領(lǐng)域中得到日益廣泛的應(yīng)用，應(yīng)用此系統(tǒng)可高水平表達(dá)蛋白，且具有翻譯后修飾功能，故被認(rèn)可為一種表達(dá)大規(guī)模蛋白的強(qiáng)有力的工具常用的酵母表達(dá)系統(tǒng)一。

8、外源基因在甲醇以外的碳源中處于非表達(dá)狀態(tài)，而在培養(yǎng)液中加入甲醇后，外源基因即被誘導(dǎo)表達(dá)巴斯德畢赤酵母中存在著一種稱為微體的細(xì)胞器，其中大量合成過氧化物酶，因此也稱為過氧化物酶體合成的蛋白質(zhì)貯存于微體中，可免受蛋白酶的降解，且不對細(xì)胞產(chǎn)生毒害12載體巴斯德畢赤酵母的載體是整合型載體常見的表達(dá)。

9、PH升高到多少有染菌的可能，嘗試現(xiàn)用低PH28左右處理一下23H，然后調(diào)回PH50，再試一試你搖床速率是多少瓶口用什么封的，建議還是用紗布，用那種帶孔的塑料膜我感覺不太靠譜，滅菌的時候沾上點水就不太透氣了。

10、為了克服這些局限，吉林師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院和吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院的研究者們創(chuàng)新性地利用畢赤酵母Pichia pastoris表達(dá)系統(tǒng)，這個高效且經(jīng)濟(jì)的真核表達(dá)平臺畢赤酵母的特性在于其甲醇誘導(dǎo)下的AOX1基因表達(dá)，可誘導(dǎo)外源蛋白編碼，如BMP4融合蛋白的生成通過將BMP4基因與IgG Fc基因融合，研究者成功實現(xiàn)了。

11、甲醇營養(yǎng)型畢赤酵母優(yōu)點1具有醇氧化酶AOX1基因啟動子，這是目前最強(qiáng)，調(diào)控機(jī)理最嚴(yán)格的啟動子之一2表達(dá)效率高，其表達(dá)的外源蛋白可占總表達(dá)蛋白的90%以上，有利于目的蛋白的分離純化3在簡單合成培養(yǎng)基中可實現(xiàn)高密度培養(yǎng)4表達(dá)質(zhì)粒能在基因組的特定位點以單拷貝或多拷貝的形式穩(wěn)定整合。

12、使用誘導(dǎo)型啟動子起始外源基因表達(dá)，如畢赤酵母用AOX醇氧化酶啟動子，利用甲醇誘導(dǎo)起始外源蛋白的表達(dá)，可自由控制添加甲醇的時期和濃度或者大腸桿菌里用Lac自動子，利用乳糖或IPTG誘導(dǎo)外源基因表達(dá)，可自由控制誘導(dǎo)物添加的時期和添加量。

13、不太可能，Invitrogen的商業(yè)化畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)屬于甲醇酵母表達(dá)系統(tǒng)，用的是畢赤酵母獨有的AOX1啟動子，由甲醇誘導(dǎo)釀酒酵母用的啟動子大多用的是GAPDH或Gal啟動子等，由葡萄糖和半乳糖誘導(dǎo)雖然兩種菌株有很多基因具有較高的同源性，但不能通用建議使用畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)，釀酒酵母表達(dá)量低，誘導(dǎo)不。

14、畢赤酵母誘導(dǎo)后SDS電泳蛋白在沉淀中是為什么 1你應(yīng)該是沒有明白什么是包涵體，簡單的說就是翻譯的蛋白沒有正確折疊而聚集在一起形成的，主要的是疏水作用實際上就是很多個蛋白分子，這些蛋白并不是交聯(lián)在一起的，用高濃度的尿素和鹽酸胍可以使他們變性，解聚2用沉淀跑電泳可以確定目的蛋白是否在包涵體。

15、1987年，Cregg等人首次報道了用甲醇營養(yǎng)型酵母表達(dá)乙型肝炎表面抗原HbsAg隨后Philip Petroleum公司與Salk Institute BiotechnologyIndustrial AssociatesSIBIA就開始了畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)的合作開發(fā)SIBIA的研究人員分離了AOX基因的啟動子和宿主菌株，構(gòu)建了載體，并開發(fā)出了相應(yīng)的畢赤酵母基因操作技術(shù)，結(jié)合。

16、1細(xì)胞增殖繁衍2分批流加的過渡階段甘油或葡萄糖3誘導(dǎo)表達(dá)階段甲醇各階段碳源都為限制性基質(zhì)，其補(bǔ)加速率的動力學(xué)模型是高效表達(dá)的基礎(chǔ)。