電轉(zhuǎn)液中SDS增加蛋白的水溶性，促進蛋白在電轉(zhuǎn)液中泳動若不加SDS，蛋白會沉淀在膠上，但SDS過多會影響蛋白與膜的吸附甲醇能使SDS與蛋白分離，甲醇濃度越高SDS與蛋白分離越快，但高濃度的甲醇對蛋白會有固定作用，不利于蛋白從膠里跑出來一般來說甲醇的濃度為20%，但PVDF膜截留marker上交聯(lián)的。

沒啥問題VDF膜一定要在純甲醇里浸潤的不然蛋白結(jié)合不上去在100%甲醇里短暫浸潤，其目的是為了活化PVDF膜上面的正電基團，使它更容易跟帶負電的蛋白質(zhì)結(jié)合小分子及大分子量的蛋白轉(zhuǎn)移時，多加或不加甲醇也是這個目的因為小分子不容易和膜結(jié)合而大分子更容易轉(zhuǎn)膜的過程，是一個恒定電場下。

通常用045μm和02μm兩種規(guī)格的PVDF膜大于20kD的蛋白可用045μm的膜，小于20kD的蛋白就要用02μm的膜了，如用045μm的膜就會發(fā)生“Blowthrough”的現(xiàn)象PVDF膜靈敏度分辨率和蛋白親和力比常規(guī)的膜要高，非常適合于低分子量蛋白的檢測2PVDF膜在使用之前必需用純甲醇浸泡飽和15秒。

首先，關(guān)于轉(zhuǎn)膜緩沖液，它通常是某種類型的鹽溶液，如Tris甘氨酸或TrisHCl緩沖液等，這些溶液的pH值一般都需要精確控制例如，在蛋白質(zhì)印跡法中，常用的轉(zhuǎn)膜緩沖液一般包含25mM Tris堿，192mM甘氨酸，以及20%的甲醇這樣的配方有助于在電場作用下，將蛋白質(zhì)從聚丙烯酰胺凝膠中有效轉(zhuǎn)移到PVDF膜上其次。