畢赤酵母是甲醇營養(yǎng)型酵母中的一類能夠利用甲醇作為唯一碳源和能源的酵母菌畢赤酵母生理特性與其他酵母一樣，在無性生長期主要以單倍體形式存在，當環(huán)境營養(yǎng)限制時，常誘導2個生理類型不同的接合型單倍體細胞交配，融合成雙倍體畢赤酵母研究意義巴斯德畢赤酵母的一個生物學特點是，甲醇代謝所需。

Koichi Ogata等人于1969年首次發(fā)現(xiàn)了某些酵母可以利用甲醇為唯一碳源和能源生長Ogata， et a11969 ，此后，用甲醇利用型酵母生產(chǎn)單細胞蛋白作為動物飼料的潛力就引起了廣泛關(guān)注1987年，Cregg等人首次報道了用甲醇營養(yǎng)型酵母表達乙型肝炎表面抗原HbsAg隨后Philip Petroleum公司與Salk Institute Biotechnology。

甲醇誘導畢赤酵母表達原理1畢赤酵母能夠高效表達外源基因，是因為其有更強的強啟動子，即醇氧化酶啟動子PAOX2甲醇營養(yǎng)型酵母能將甲醇分解為甲醛和過氧化氫，在此反應中參與的酶是醇氧化酶AOX1和AOX2。

因此，一般不用釀酒酵母做重組蛋白質(zhì)表達的宿主菌 二，甲醇營養(yǎng)型酵母表達系統(tǒng)甲醇酵母表達系統(tǒng)是目前應用最廣泛的酵母表達系統(tǒng)目前甲醇酵母主要有漢森酵母屬Hansenula，畢赤酵母屬Pichia，球擬酵母屬Torulopsis等，并以畢赤酵母屬Pichia應用最多甲醇酵母的表達載體為整合型質(zhì)粒，載體中含有與。

而最近幾年每年報道的在畢赤酵母中表達的外源基因就有幾十種，且一年比一年多，與其它表達系統(tǒng)相比，畢赤酵母表達系統(tǒng)具有以下優(yōu)勢1含有特有的強有力的AOX醇氧化酶基因啟動子，用甲醇可嚴格地調(diào)控外源基因的表達2表達水平高，即可在胞內(nèi)表達，又可分泌型表達畢赤酵母中，報道的最高表達。

甲醇畢赤酵母電轉(zhuǎn)化條件的研究 摘 要采用電轉(zhuǎn)化的方法，將攜帶有組織型纖溶酶原激活劑突變體tPA355基因的 DNA 片段 轉(zhuǎn)化進甲醇畢赤酵母Pichia methanolica通過調(diào)整參數(shù)，對影響電轉(zhuǎn)化效率的主要因素進行探討，建立了質(zhì)粒 pMETαtPA355對甲醇畢赤酵母 PMAD16 的高效電轉(zhuǎn)化方法， 得出轉(zhuǎn)化。

畢赤酵母表達系統(tǒng)的優(yōu)勢在于其高效穩(wěn)定且低成本，可以選擇胞內(nèi)或胞外分泌路徑胞外分泌路徑尤其適合工業(yè)生產(chǎn)，通過優(yōu)化甲醇濃度，可進一步提高蛋白純化效率此外，離子交換層析作為純化手段，如DEAE層析，利用其電荷分離特性，不僅能有效去除雜蛋白，而且在大規(guī)模生產(chǎn)中展現(xiàn)出了良好的可擴展性和自動化特性。

含有抗生素巴斯德畢赤酵母，是甲醇營養(yǎng)型酵母中的一類能夠利用甲醇作為唯一碳源和能源的酵母菌，畢赤酵母化學轉(zhuǎn)化不進去的原因含有抗生素，化學轉(zhuǎn)化采用熱化學技術(shù)將生物質(zhì)轉(zhuǎn)換成其他能量形式。

八十年代巴斯德畢赤酵母曾被用于生產(chǎn)單細胞蛋白SCP，有很好的發(fā)酵基礎，菌體密度可達100gL干重其生長培養(yǎng)液的組分包括無機鹽微量元素生物素氮源和碳源，廉價而無毒它能在以甲醇為唯一碳源的培養(yǎng)基中快速生長，其中醇氧化酶AOX甲醇代謝途徑的關(guān)鍵酶可達細胞可溶性蛋白的30%而在葡萄糖。

巴斯德畢赤酵母在上世紀曾因其出色的單細胞蛋白SCP生產(chǎn)性能而備受矚目，其菌體密度最高可達100克每升干重，顯示出極強的發(fā)酵潛力這種酵母的生長培養(yǎng)基由無機鹽微量元素生物素氮源和碳源構(gòu)成，這些成分既經(jīng)濟又無害特別的是，它能在以甲醇為唯一碳源的環(huán)境中快速繁殖，其中甲醇氧化酶AOX。

PH升高到多少有染菌的可能，嘗試現(xiàn)用低PH28左右處理一下23H，然后調(diào)回PH50，再試一試你搖床速率是多少瓶口用什么封的，建議還是用紗布，用那種帶孔的塑料膜我感覺不太靠譜，滅菌的時候沾上點水就不太透氣了。

并經(jīng)過翻譯折疊和修飾等步驟蛋白質(zhì)通常以分泌形式積累在細胞外或細胞內(nèi)感受態(tài)誘導基因如AOX1基因是響應甲醇的誘導子，當添加甲醇時，會啟動該基因的表達通過適當控制聚甲醇濃度和培養(yǎng)時間，可以實現(xiàn)目標蛋白在感受態(tài)下的高水平表達畢赤酵母gs115感受態(tài)制備的原理主要是通過構(gòu)建表達載體轉(zhuǎn)化。

13GFPSKL畢赤酵母發(fā)酵綠色素成分為13GFPSKL，被分選到過氧化物酶體中，巴斯德畢赤酵母，是甲醇營養(yǎng)型酵母中的一類能夠利用甲醇作為唯一碳源和能源的酵母菌與其它酵母一樣，在無性生長期主要以單倍體形式存在。

2表達效率高，其表達的外源蛋白可占總表達蛋白的90%以上，有利于目的蛋白的分離純化3在簡單合成培養(yǎng)基中可實現(xiàn)高密度培養(yǎng)4表達質(zhì)粒能在基因組的特定位點以單拷貝或多拷貝的形式穩(wěn)定整合5由于該酵母可以以甲醇為唯一碳源和能源，而絕大多數(shù)微生物并不能以甲醇為碳源，可以減少污染。

胞內(nèi)表達載體主要有pHIL，MG1003，GS115 AOX1，KM71，SMD1168畢赤酵母宿主菌常用的有GS115和KM71兩種，都具有HIS4營養(yǎng)缺陷標記其中，GS115菌株具有AOX1基因，是Mut+，即甲醇利用正常型而KM。