用70%的酒精是因?yàn)檫@個(gè)濃度對(duì)沉淀DNA效果最好,并且異丙醇能溶于酒精,去除異丙醇,然后揮發(fā)酒精,似乎還能除鹽個(gè)人見(jiàn)解異丙醇沉淀以后不必用70%乙醇洗只有醋酸鈉 乙醇沉淀之后才需要70%乙醇洗,目的是洗去加入的鹽。
晚上好,DNA的結(jié)構(gòu)由核苷酸組成但歸根結(jié)底還是保留有脫氧核糖的戊糖結(jié)構(gòu),也就是說(shuō)和葡萄糖蔗糖有相似性無(wú)水乙醇雖然和水一樣屬于極性溶劑但是它畢竟是兼容水形成氫鍵所以極性沒(méi)有水分子強(qiáng)和氯化鈉溴化鉀硫酸銅這些離子晶體只溶于水而不溶于乙醇是相同道理,水合能非常高請(qǐng)酌情參考嘌呤。
而此時(shí)鹽的陽(yáng)離子會(huì)與DNA結(jié)合形成DNA陽(yáng)離子鹽溶于溶液中,再用無(wú)水乙醇可以將DNA陽(yáng)離子鹽沉淀下來(lái),但這樣一來(lái),DNA中就含有較多的鹽離子,這勢(shì)必會(huì)影響下一步實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行,所以要用70%乙醇洗滌DNA沉淀因?yàn)樵?0%乙醇里DNA是不溶的,而鹽離子卻可溶,用無(wú)水乙醇則達(dá)不到這個(gè)目的!OK。
核酸不溶于乙醇,所以可以使用乙醇對(duì)核酸進(jìn)行漂洗,使殘留的雜質(zhì)溶解于乙醇,并最終通過(guò)離心去除可總結(jié)為去除DNA中的殘留雜質(zhì)對(duì)混雜的RNA無(wú)效提取時(shí),保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過(guò)高濃度的金屬離子其他生物大分子如蛋白質(zhì)多糖和脂類分子的污染應(yīng)。
乙醇的優(yōu)點(diǎn)是可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會(huì)起任何化學(xué)反應(yīng),對(duì)DNA很安全,因此是理想的沉淀劑DNA 溶液是DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在,當(dāng)加入乙醇時(shí),乙醇會(huì)奪DNA周圍的水分子,使DNA失水而易于聚合一般實(shí)驗(yàn)中,是加2倍體積的無(wú)水乙醇與DNA相混 合,其乙醇的最終含量占67%左右因而也可改用95%。
這里沒(méi)發(fā)生化學(xué)反應(yīng),這個(gè)原理就是DNA在不同濃度下的NaCl溶液中溶解度不同,在某個(gè)濃度下析出酒精的原因是為了提純,DNA不溶酒精,但實(shí)驗(yàn)材料中的一些雜質(zhì)溶于酒精,所以就做到了初步提純不是用酒精沉淀的,是在NaCl中沉淀出來(lái)的 你再仔細(xì)琢磨下這個(gè)實(shí)驗(yàn),不懂的可以再問(wèn)。
用70%的酒精是因?yàn)檫@個(gè)濃度對(duì)沉淀DNA效果最好,并且異丙醇能溶于酒精,去除異丙醇,然后揮發(fā)酒精,似乎還能除鹽個(gè)人見(jiàn)解異丙醇沉淀以后不必用70%乙醇洗只有醋酸鈉乙醇沉淀之后才需要70%乙醇洗,目的是洗去加入的鹽。
DNA易溶于酒精,而DNA中的某些雜質(zhì)不溶于酒精。
95%的乙醇是用來(lái)溶解其他的雜質(zhì),因?yàn)镈NA不溶于酒精,所以過(guò)濾后就只把DNA濾掉,一部分能溶于酒精的雜質(zhì)就留在酒精里了核酸酶在體外適宜的條件也可以降解DNA,因此提核酸要在低溫下進(jìn)行,盡量減少DNA的降解。
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