1、一般蛋白變性沉淀方法有氯仿甲醇沉淀， TCA沉淀非變性沉淀方法是在保持低溫下，加入硫酸銨，PEG，或者有機(jī)溶劑如丙酮，乙醇，甲醇，非變性沉淀中硫酸銨和PEG可能會是蛋白沉淀不完全，而有機(jī)溶劑在低溫下也會使部分蛋白質(zhì)變性，所以要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康纳髦剡x擇分離蛋白質(zhì)常用的方法有蛋白沉淀，超濾，柱；原理是與水互溶的有機(jī)溶劑如甲醇乙醇能使一些蛋白質(zhì)在水中的溶解度顯著降低而且在一定溫度pH值和離子強(qiáng)度下，引起蛋白質(zhì)沉淀的有機(jī)溶劑的濃度不同，因此，控制有機(jī)溶劑的濃度可以分離純化蛋白質(zhì)；甲醇沉淀蛋白優(yōu)點(diǎn)1分辨能力比鹽析法高，即蛋白質(zhì)或其它溶劑只在一個比較窄的有機(jī)溶劑濃度下沉淀2沉淀不用脫鹽，過濾較為容易乙腈優(yōu)點(diǎn)又名甲基氰，無色液體，極易揮發(fā)，有類似于醚的特殊氣味，有優(yōu)良的溶劑性能，能溶解多種有機(jī)無機(jī)和氣體物質(zhì)缺點(diǎn)有一定毒性，與水和醇無限互溶乙；無機(jī)鹽沉淀蛋白是可逆的即將樣品稀釋后蛋白仍具有生理活性而有機(jī)溶劑與 酸類沉淀的蛋白是不可逆的， 用甲醇沉淀蛋白的優(yōu)點(diǎn)是上清液清涼， 沉淀為絮 狀易于分離，乙睛與之相反， 產(chǎn)生細(xì)的蛋白沉淀在做血漿樣品時，用甲醇或乙腈沉淀蛋白，一般用血漿與沉淀劑的比例為乙，有實(shí)驗(yàn)顯示以血清，甲醇最低13一般15以上；“蛋白質(zhì)的變性”是指蛋白質(zhì)分子中的次級鍵被破壞主要是氫鍵和離子鍵甲醇乙醇丙酮等有機(jī)溶劑可以提供自己的羥基或羰基上的氫或氧去形成氫鍵，從而破壞了蛋白質(zhì)中原有的氫鍵，使蛋白質(zhì)變性而引起蛋白質(zhì)沉淀的原因一方面是由于甲醇乙醇丙酮等有機(jī)溶劑加入水中使溶劑介電常數(shù)降低，增加了相反。

2、“蛋白質(zhì)的變性”是指蛋白質(zhì)分子中的次級鍵被破壞主要是氫鍵和離子鍵甲醇乙醇丙酮等有機(jī)溶劑可以提供自己的羥基或羰基上的氫或氧去形成氫鍵，從而破壞了蛋白質(zhì)中原有的氫鍵，使蛋白質(zhì)變性而引起蛋白質(zhì)沉淀的原因一方面是由于甲醇乙醇丙酮等有機(jī)溶劑加入水中使溶劑介電常數(shù)降低，增加了相反電荷的吸引力，另；甲醇和高氯酸沉淀蛋白的區(qū)別 鹽析法 多用于各種蛋白質(zhì)和酶的分離純化在蛋白質(zhì)溶液中加入大量的中性鹽以破壞蛋白質(zhì)的膠體穩(wěn)定性而使其析出，這種方法稱為鹽析常用的中性鹽有硫酸銨硫酸鈉氯化鈉等各種蛋白質(zhì)鹽析時所需的鹽濃度及pH不同，故可用于對混和蛋白質(zhì)組分的分離例如用半飽和的；因此在電場中可以移動6凡能與水以任意比例混合的有機(jī)溶劑，在相互接觸的兩相固定相與流動相之間的分布不同而進(jìn)行分離2氯化鈉超速離心5，大分子蛋白質(zhì)不能進(jìn)入孔內(nèi)而徑直流出甲醇，均可引起蛋白質(zhì)沉淀常用的中性鹽有，因此不同大小的蛋白質(zhì)得以分離，小分子蛋白質(zhì)進(jìn)入孔內(nèi)，因而在柱中滯留；鹽析法可以使蛋白質(zhì)沉淀鹽析法的原理 蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解度取決于蛋白質(zhì)分子表面離子周圍的水分子數(shù)目，亦即主要是由蛋白質(zhì)分子外周親水基團(tuán)與水形成水化膜的程度以及蛋白質(zhì)分子帶有電荷的情況決定的蛋白質(zhì)溶液中加入中性鹽后，由于中性鹽與水分子的親和力大于蛋白質(zhì)，致使蛋白質(zhì)分子周圍的水化層減弱。

3、甲醇乙醇丙酮等有機(jī)溶劑可以提供自己的羥基或羰基上的氫或氧去形成氫鍵，從而破壞了蛋白質(zhì)中原有的氫鍵，使蛋白質(zhì)變性而引起蛋白質(zhì)沉淀的原因一方面是由于甲醇乙醇丙酮等有機(jī)溶劑加入水中使溶劑介電常數(shù)降低，增加了相反電荷的吸引力，另一方面是因?yàn)檫@些有機(jī)溶劑是強(qiáng)親水試劑，爭奪蛋白質(zhì)分子表面；β鹽析固定離子強(qiáng)度，改變pH及溫度2等電點(diǎn)沉淀法 蛋白質(zhì)等電點(diǎn)沉淀法是基于不同蛋白質(zhì)離子具有不同等電點(diǎn)這一特性，依次改變?nèi)芤簆H值的辦法，將雜蛋白沉淀除去，最后獲得目標(biāo)產(chǎn)物3有機(jī)溶劑沉淀法 許多能與水互溶的有機(jī)溶劑如乙醇丙酮甲醇和乙腈，常用于低鹽濃度下沉淀蛋白質(zhì)4非；有機(jī)溶劑沉淀蛋白質(zhì)的原理是加入有機(jī)溶劑使水溶液的介電常數(shù)降低，因而增加了兩個相反電荷基團(tuán)之間的吸引力，促進(jìn)了蛋白質(zhì)分子的聚集和沉淀一有機(jī)溶劑沉淀法 利用與水互溶的有機(jī)溶劑如甲醇乙醇丙酮等能使蛋白質(zhì)在水中的溶解度顯著降低而沉淀的方法，稱為有機(jī)溶劑沉淀二影響因素 1有。

4、若不加SDS，蛋白會沉淀在膠上，但SDS過多會影響蛋白與膜的吸附甲醇能使SDS與蛋白分離，甲醇濃度越高SDS與蛋白分離越快，但高濃度的甲醇對蛋白會有固定作用，不利于蛋白從膠里跑出來一般來說甲醇的濃度為20%，但PVDF膜截留marker上交聯(lián)的小分子顏料的能力很差，可考慮提升甲醇的濃度至25%它對；沉淀蛋白，離心分離，再過柱純化，進(jìn)一步濃縮；沉淀不會是百分之百的，而且實(shí)驗(yàn)操作過程中總會有損失；乙腈和甲醇是常用的溶劑，在生物樣品沉淀中常被用到乙腈和甲醇有一些獨(dú)特的特性，使它們在生物樣品沉淀中更加有效首先，乙腈和甲醇都具有很好的溶解能力，可以溶解大多數(shù)蛋白質(zhì)和核酸因此，在沉淀生物樣品時，乙腈和甲醇可以有效地溶解蛋白質(zhì)和核酸，使它們更容易被沉淀其次，乙腈和甲醇具有較低的；2等電點(diǎn)沉淀法蛋白質(zhì)在靜電狀態(tài)時顆粒之間的靜電斥力最小，因而溶解度也最小，各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)有差別，可利用調(diào)節(jié)溶液的pH達(dá)到某一蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)使之沉淀，但此法很少單獨(dú)使用，可與鹽析法結(jié)合用3低溫有機(jī)溶劑沉淀法用與水可混溶的有機(jī)溶劑，甲醇，乙醇或丙酮，可使多數(shù)蛋白質(zhì)溶解度。

5、甲醇沉淀血漿超過3000×g時離心力可以沉淀干凈根據(jù)查詢相關(guān)公開信息顯示，血漿中的紅細(xì)胞血小板等因子比重大，而抗體和血漿內(nèi)源性蛋白的比重相對較小，在相對離心力的作用下，紅細(xì)胞和血小板會下沉，而抗體和血漿內(nèi)源性蛋白則會保持在懸浮液中。